摘要温郁金块根中β-榄香烯含量较低，使得目前提取生产方式难度大、得率低、成本高。因此对榄香烯生物合成途径的限速酶基因功能进行研究对榄香烯生物合成制备具有重要意义。【目的】确定温郁金生物合成途径中限速酶的关键氨基酸位点，进行定点突变，再筛选出酶活力较高、副产物最少的温郁金吉马烯A合酶突变体。【方法】利用定点突变技术对关键基因吉马烯A合酶进行突变，用实验组筛选出的最佳催化反应条件，运用固相微萃取技术分析榄香烯的含量。【结果】成功将温郁金中吉马烯A合酶两个基因位点进行突变，其中一个位点突变后气相检测榄香烯含量减少。【结论】突变后含量减少的氨基酸位点对催化活性较为重要，在催化过程中比较保守，所以不能突变为其他氨基酸。本研究结果为进一步改造吉马烯A合酶提供了参考。89287

Abstract    The content of Curcuma wenyujin in root is low, casing the current methods of extraction and production difficult , low yield and high cost。 Therefore,the study on the way of rate-limiting enzyme gene of elemene biosynthetic function have great significance to the preparation of elemene biosynthesis。 【Objective】Ensuring the key amino acid position sites of rate-limiting enzymes in the Curcuma wenyujin biosynthetic pathway, and carrying on site-directed mutations, Then Screening out the Curcuma wenyujin germacrene A mutants with higher activity and minimal byproducts。 【Method】making the key gene of germacrene A synthase mutations  by site-directed mutagenesis technology。 Using the experimental group screened out the best catalytic reaction conditions。【Result】Two genes position point were successfully mutated in the germacrene A synthase of Curcuma wenyujin, one of the position point mutations in the gas phase after detection of elemene content is decreased。 【Conclusion】Amino acid sites with reduced content after mutation are important for catalytic activity。 And the catalytic process are conservative,So it can not mutate into other amino acids。 The results of this study provide a reference for further Mutation of Germacrene A synthase。

毕业论文关键词：温郁金; 榄香烯; 吉马烯A合酶

Keyword: Curcuma wenyujin; Elemene; Germacrene A synthase

目    录

1   引言 5

1。1  温郁金的简介 5

1。2  温郁金中榄香烯的临床价值 5

1。3  萜类化合物生物合成途径 5

1。4  吉马烯A合酶的概述 6

1。5  本研究目的及其意义 6

1。6  本研究的技术路线 6

2   吉马烯A合酶基因的突变及转化 6

2。1  实验材料 6

2。1。1  实验试剂 6

2。1。2  实验源Y于U优I尔O论P文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201-8766 仪器 7

2。1。3  培养基及试剂的配制 7

2。2  实验方法及操作步骤 8

2。2。1  GCS质粒提取及琼脂糖凝胶验证 8

2。2。3  去掉模板质粒DNA 9

2。2。4  转化，筛选阳性克隆 9

2。2。5  菌落PCR 10

2。2。6  提质粒、BL21（DE3）感受态细胞转化