2。3  实验结果 10

2。3。1  大肠杆菌GCS质粒提取 10

2。3。2  突变PCR 11

2。3。3  菌落PCR验证 12

2。3。4  测序 14

3   吉马烯A合酶基因的表达和催化性质的研究 15

3。1  实验材料 15

3。1。1  实验试剂 15

3。1。2  实验仪器 15

3。1。3  试剂的配制 15

3。2  实验方法 17

3。2。1  吉马烯A合酶的诱导表达 17

3。2。2  蛋白收集 17

3。2。3  蛋白凝胶电泳（SDS-PAGE凝胶电泳） 18

3。2。4  吉马烯A合酶的催化性质研究 19

3。3  实验结果及分析 20

3。3。1  蛋白凝胶电泳 20

3。3。2  反应产物气相的验证 21

4    实验总结及展望 23

参考文献 24

致谢 25

1   引言

目前，癌症现已成为了危害我国居民生命和健康的重要慢性非传染性疾病。现已成为疾病死因之首，发病率和死亡率都不断在攀升，已经是非常重要的公共健康问题，严重消耗我国的医疗卫生和社会资源。据《中国肿瘤》发布的最新恶性肿瘤的数据分析显示，我国2012 年的新增肿瘤发病例为358。6 万例[1]。从传统中药中探索抗癌新药一直是抗癌药物研究的重要方向，目前从中已经发现了很多新型抗癌成分，如靛玉红、喜树碱等。本课题研究的中药温郁金来源的榄香烯就是被成功开发上市的新型抗癌药物。来自优Q尔W论E文R网wWw.YouERw.com 加QQ75201.8766

1。1  温郁金的简介

温郁金（Curcuma wenyujin）是姜科姜黄属植物，从中分离得到的化学成分有80余种，主要为萜类(倍半萜、单萜、二萜等)、 姜黄素类等，其药理作用也主要表现为萜类成分的抗肿瘤、抗炎、解热镇痛等[2]。温郁金中的β-榄香烯对肿瘤细胞生长有直接抑制作用，可阻滞肿瘤细胞从S期进入G2M期，抑制其增殖并迅速导致其凋亡[4]。因此对温郁金中榄香烯系列抗肿瘤新药的开发和临床应用也正如火如荼地进行，但标准化、规范化栽培技术及重金属、农药、化肥等控制方面与国际先进水平仍然存在较大的差距，导致所产中药药效成份含量不稳定，使得榄香烯原料药的生产成本较高，对其市场推广和全球化营销起到一定的阻碍作用。

1。2  温郁金中榄香烯的临床价值

榄香烯在临床运用时具有以下几类特点：（1）高效、副作用少；（2）能够改善微循环，有助于化疗、放疗药物进入癌组织发挥作用；（3）具有选择性抑制肿瘤细胞增殖和提高免疫功能的双重效应；（4）还可直接作用于细胞膜，使肿瘤细胞破裂死亡。（5）逆转肿瘤细胞耐药性。因此榄香烯正被广泛应用于肺癌、胃癌、大肠癌等恶性肿瘤的治疗。

目前β-榄香烯口服乳和注射液药物（其中β-榄香烯含量为95%以上，δ，γ-榄香烯含量为约3%）作为国家二类新药在临床上已经取得了显著的疗效。但是从植物分离提取β-榄香烯成本高、纯度低以及化学合成步骤繁琐、要求条件苛刻等缺点，限制了β-榄香烯的进一步应用。因此，寻找经济可行的，大规模制备β-榄香烯的技术对于β-榄香烯药物的推广应用将具有重要意义。