2。1。3  培养基及试剂的配制

1） LB液体培养基             

□组份浓度 1％（W/V）Tryptone，0。5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl 

□配制量 1L 

□配置方法 1。 称量下列试剂，置于1L烧杯中 

Tryptone                           10g    Yeast Extract                    5g 

   NaCl                               10g 

                         2。 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 

                         3。 滴加NaOH，调节PH值至7。0。 

                         4。 高温高压灭菌后，4℃保存。   

LB固体培养基则再加入2 g琼脂粉。

2）0。5M EDTA (PH8。0)           

□组份浓度 0。5 M EDTA 

□配制量 1L 

□配置方法 1。 称取186。1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。

           2。 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。 

           3。 用NaOH调节PH值值8。0（约20g NaOH）。

           4。 加去离子水将溶液定容至1L。 

           5。 适量分成小份后，高温高压灭菌。 

           6。 室温保存。 文献综述                   

2。2  实验方法及操作步骤

2。2。1  GCS质粒提取及琼脂糖凝胶验证

用活化后的温郁金GCS-大肠杆菌BL21（DE3）菌，试剂盒提取质粒DNA作为模板。

操作步骤：

1）取1ml LB 培养基过夜培养的菌液放入1。5ml的EP管中，离心机中以11000rpm离心1min，弃去上清，然后经过多次离心将菌体收集到一个离心管中。