的结构逐渐被打开，内部的极性氨基酸和芳香族氨基酸也逐渐被释放出来，此时溶 液中极性逐渐增大，而可以释放荧光的氨基酸也逐渐增多，因此蛋白质荧光发射峰 的 λmax 逐渐增大。λmax 红移的程度也可以用于反映蛋白质构象变化的程度，红移 程度越大，则表明蛋白质在变性过程中蛋白质打开的程度和构象变化得越大。反过

来说，蛋白质在复性过程中，芳香族氨基酸重新被非极性氨基酸包埋进蛋白质内部， 极性氨基酸也随之被包埋进内部，溶液极性也因此降低，因此蛋白质荧光发射峰的 λmax 则逐渐减小故称为 λmax 的蓝移现象。我们同样可以通过测定蛋白质 λmax 蓝移 的程度，从而推算蛋白质复性和其整体构象变化的程度[28]。在不同复性时间变化来;自]优Y尔E论L文W网www.youerw.com +QQ752018766-

下的光谱图，整体趋势与变性时相反，它的最大波长向短波方向移动，说明蛋白质 的构象在发生一定的变化，松散的结构逐渐盘曲折叠形成四级结构，蛋白发生复性， 且随着复性时间的增加，蓝移程度越来越大，表明蛋白质的构象逐渐恢复到天然构 象状态。

1。4。4  远紫外圆二色谱法

圆二色谱是研究稀溶液中蛋白质构象的一种快速、简单、较准确的方法之一。 1969 年，Greenfield[28]最早建立起圆二色谱法用于测蛋白质的二级结构。他选用三 个己知射线衍射三维结构的蛋白，都过测定蛋白质的圆二色谱数据并分析结果,从 而用来估算蛋白质的特殊构象。此后，相关的研究方法陆续也有报道。

近十几年来，越来越多的研究者利用远紫外圆二色谱来分析蛋白质的二级结构。 圆二色谱在蛋白质结构研究上有着其特定的优势,近些年，随着射线晶体衍射技术 和核磁共振技术的不断提高，圆二色谱在计算方法、拟合程序上都有了长足的进步。 作为研究溶液状态下蛋白质或多肽构象的一种重要手段，光谱技术受到来自世界各 地研究者们的广泛关注[23]。