利用冰晶核蛋白构建磷酸盐吸附蛋白大肠杆菌细胞表面展示体系(6)
重组大肠杆菌JM109 OD600nm
大肠杆菌JM109 OD600nm
0.014
图4 重组菌和对照菌的生长曲线
由图4可知，培养4h后，重组大肠杆菌和对照大肠杆菌JM109的生长均处于对数生长期，8h以后基本处于稳定期，培养到14h时，两菌株的OD660 均无显著差异（P＞0.05）。该结果表明，转入的磷酸盐吸附蛋白基因片段对于菌的生长没有造成负担.
3.2磷酸盐标准曲线
根据实验方法测得磷酸盐标准溶液及吸光值见表3。根据测得数据绘制标准曲线，见图5。
表3 磷酸盐标准溶液吸光度测定
试管号 1 2 3 4 5 6
PO43-含量mg/ml 0 0.04 0.08 0.40 0.80 1.20
OD660nm 0.003 0.012 0.031 0.151 0.301 0.474
图5 磷酸盐标准曲线
3.3 磷酸盐吸附能力分析
IPTG诱导重组大肠杆菌后磷酸盐吸附量及对照大肠杆菌JM109磷酸盐吸附量见表4和表5。由图6可见，在IPTG处理后，对照组大肠杆菌JM109培养液中磷酸盐浓度一直文持在较高的水平，但重组菌大肠杆菌培养液中磷酸盐浓度则显著下贱，统计学分析表明，两菌株在培养4h，培养液中磷酸盐浓度无显著差异（P＞0.05）；但在培养8h后，重组菌磷浓度显著低于对照组（P＜0.05）；培养10h后，重组菌培养液中磷酸盐浓度下降到0.39 mg／mL，约为对照菌的81%。
表4 重组菌大肠杆菌磷酸盐吸附能力测定
时间h 0 1 2 4 6 8 10
吸光度OD660nm 0.194 0.194 0.190 0.186 0.178 0.159 0.151
PO43-含量mg/ml 0.50 0.50 0.49 0.48 0.46 0.41 0.39
表5 对照组大肠杆菌JM109磷酸盐吸附能力测定
时间h 0 1 2 4 6 8 10
吸光度OD660nm 0.194 0.194 0.194 0.194 0.190 0.186 0.186
PO43-含量mg/ml 0.50 0.50 0.50 0.50 0.49 0.48 0.48
图6 IPTG处理后重组大肠杆菌和对照菌培养液中磷酸浓度的比较
4.结论
从phos基因的PCR扩增结果发现（图1），目的基因phos为972bp，条带清晰，但有非特异性扩增条带出现。这可能是PCR扩增过程中设置的退火温度较低导致。
克隆大肠杆菌磷酸盐吸附蛋白基因，转入大肠杆菌JM109中，构建重组菌，该基因能在重组菌中高效表达。
重组菌生长优于对照菌。在IPTG的诱导后，重组菌能大量表达磷酸盐吸附蛋白，磷酸盐浓度约为对照菌的磷酸盐浓度的0.81倍，可见有较好的除磷效果。
在大肠杆菌重组菌中，10 h内KH2PO4吸附量达到0.11 mg／mL，对照大肠杆菌JMl09则没有明显磷酸盐吸附能力，可见重组菌显示出高磷酸盐吸附能力。受体菌的吸附能力较低是因为磷酸盐在细菌细胞内浓度有限，一旦达到一定的浓度细菌本身不再从外界环境中转运磷酸盐，因此，对降低环境中磷酸盐含量的能力有限。
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