摘 要通过大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）制备GLP-1（glucagon-like peptide 1,GLP-1）类似物，通过离子交换层析纯化获得较高纯度的GLP-1类似物。方法  根据实验室提取的工艺流程，将大肠杆菌表达制备的GLP-1类似物粗品用离子交换层析纯化，分别考察了不同类型的填料、缓冲液ph、离子强度、洗脱时间等条件的改变对离子交换色谱法分离纯化GLP-1类似物的影响，把收到的样品通过电泳来检测目的蛋白纯度，已知目的蛋白的大小为3kDa,需要去除的杂蛋白大小为14kDa。结果 使用Nano Micro UniQ-30S柱，当缓冲液A为100mM Tris-Hcl，2M Urea,缓冲液B为100mM Tris-Hcl，2M Urea，1M NaCl,ph为10.0，洗脱时间为30个柱体积时，能获得较高纯度的目的蛋白。 结论 使用Nano Micro UniQ-30S柱，通过一定的方法分离纯化获得较高纯度的目的蛋白，对GLP-1类似物的分离纯化提供一定的数据参考。71676

毕业论文关键词: 大肠杆菌  GLP-1类似物 分离纯化

The research on purifying GLP-1 analogueusing by ion exchange chromatography 

Abstract Manufacture and get high purity by ion exchange chromatography purification of the GLP-1 (glucagon - like peptide 1, GLP-1) analogues By e. coli (Escherichia coli, E.coli). Methods: According to laboratory extraction process. The e. coli expression preparation raw GLP-1 analogues with ion exchange chromatography purification, respectively investigates the different types of fillers, buffer PH, ionic strength and elution time conditions of the change of ion exchange chromatography purification GLP-1 analogues, the influence of the received samples by SDS-PAGE electrophoresis to detect the purity of target protein, known as the size of the target protein 3 kda, which needs to remove impurity for 14 kda protein size. Result: when it through the Nano UniQ-30S chromatography, whose buffer A for 100 mm Tris Hcl , 2 m Urea and buffer B for 100 mM Tris- Hcl , 2 M Urea ,1 M NaCl with pH 10.0, elution time for 30 column volume, protein can obtain high purity of purpose. Conclusion: Using the Nano Micro UniQ - 30 s column, through a certain method protein purification to obtain high purity of purpose, for the separation and purification of glp-1 analogues provide certain reference data.

Key words: colibacillus  GLP-1 analogues  Separation and purification

目录

摘要 I

Abstract II

目录 III

引言 1

1.材料与方法 2

1.1 原料与试剂 2

1.2 实验仪器 2

1.3 实验方法 2

2.结果与分析 4

2.1制备GLP-1类似物 4

2.2离子交换层析分离（QFF柱） 4

2.3离子交换层析分离（UniQ-30S柱） 4

3.结论 12

4.讨论 13

参考文献 15

致谢 16

引言

社会的发展促进人们生活水平的提高，但不健康的生活方式使很多疾病开始危害人们的生活健康。糖尿病就是严重危害人类身体健康的疾病之一，一旦患上，无法治愈。而且随着年龄的增长，还会引起各种各样的并发症。论文网

目前，我国糖尿病患者已逾9240万人，占全球的四分之一，且快速增长的势头令人担忧。其中2型糖尿病的患者年龄日趋年轻化，半数以上的患者伴随着超重或者肥胖，而肥胖又是导致糖尿病高发的主要原因之一。2型糖尿病是以胰岛素抵抗伴有胰岛素分泌不足导致高血糖为特征的代谢性疾病，胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)不仅可以刺激胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌及胃排空来降低血糖;而且还有修复β细胞,减缓β细胞凋亡,促进其再生的独特作用[1]。但人体天然的GLP-1类似物很不稳定，可被二肽基肽酶Ⅳ降解，半衰期仅为1-2min。所以针对GLP-1的分子结构的改造成为近几年来药物开发的新热点，陆续成功开发并上市的人GLP-1类似物的疗效显著[2] 。GLP-1类似物具有独特的血糖浓度依赖性的控制血糖效果，为2型糖尿病患者提供了新的用药选择[3]。GLP-1类似物，又被称为肠促胰高素样肽-1类似物，与天然人的GLP-1分子相比有一个氨基酸的差异性，同时增加了一个脂肪酸侧链，与天然人的GLP-1有95%同源性。而且由于脂肪酸侧链的存在，其分子不易被DPP-IV降解，并且因能与白蛋白结合而具有较高的代谢稳定性，t1/2能长达12-14小时。