1。1。5已知的LHX6作用： 3

1。1。6 人类神经系统 4

第二章 实验试剂及仪器 5

2。1 实验材料 5

2。1。1 实验试剂 5

2。1。2 实验仪器 6

第三章 实验方法 6

3。1 小鼠特性与实验规范 6

3。1。1 小鼠的特点 6

3。1。2 饲养管理要求 7

3。1。3 小鼠基本操作技术 7

3。2 DNA采集与提取 8

3。2。1 DNA采集 8

3。2。2 DNA提取 8

3。3 引物设计 8

3。4 聚合酶链式反应（PCR） 9

3。4。1步骤： 9

3。4。2 PCR条件 10

3。4。3 PCR反应体系（30ul） 11

3。5 琼脂糖凝胶电泳 11

第四章 实验结果 12

第一章 引言

1。1背景介绍

1。1。1基因敲除源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766

    基因敲除技术，也被称为基因靶向性，是指一种遗传工程技术，根据序列已知但功能未知的基因，将他们转移到别的基因，使那些基因是去某些功能和特性，然后再转移到模式生物内，观察模式动物的形态行为，来直接对基因对机体产生的影响进行研究，随着科技的发展，除了同源重组技术的应用，新的基因插入突变技术和iRNA也开始被应用，他们也可以达到基因敲除的目的。

    基因敲除主要包括下列技术：①构建重组载体；②同源干细胞的筛选 ③动物模型的建立；④将重组DNA转入受体细胞核内。

基因敲除载体通常包含两个区段和靶同源性侧翼区，不同的来源和为了不同的目的序列，具有用于药物筛选的标记作用 ，用于构建基因靶向策略的载体通常具有两种插入载体形式：①位于同源序列的断裂位点，选择与其相邻的同源目的序列的基因，载体DNA同源序列和同源重组的染色体靶位点，整合载体后进入染色体靶点，②置换载体：断裂位点位于同源染色体序列的外部或两侧，同源基因的选择位于靶序列内部或外部，DNA序列和同源载体与染色体有两个同源重组靶位点，发生同源序列载体置换染色体靶序列。

1。1。2实现基因敲除的多种原理和方法

    ①利用基因同源重组进行基因敲除：基因载体的构建；细胞的获得；同源重组；选择筛选已击中的细胞；表型研究；得到纯合体。通过同源重组消除细胞或动物中靶基因的活性。

    ②诱导性基因敲除法：常见的几种诱导性类型有：四环素诱导型；干扰素诱导型；激素诱导型；腺病毒介导型，该方法使用一些随机插入的病毒，细菌或其他基因载体的基因序列，根据细胞的不同，插入载体的选择也有所不同。逆转率病毒可用于动植物细胞的插入；噬菌体可用于细菌基因敲除。

    ③利用随机插入突变进行基因敲除：此法利用某些能随机插入基因序列的病毒，细菌或其他基因载体，在目标细胞基因组中进行随机插入突变，建立一个携带随机插入突变的细胞库，然后通过相应的标记进行筛选获得相应的基因敲除细胞[8]。