2

1。1。5已知的LHX6作用: 3

1。1。6 人类神经系统 4

第二章 实验试剂及仪器 5

2。1 实验材料 5

2。1。1 实验试剂 5

2。1。2 实验仪器 6

第三章 实验方法 6

3。1 小鼠特性与实验规范 6

3。1。1 小鼠的特点 6

3。1。2 饲养管理要求 7

3。1。3 小鼠基本操作技术 7

3。2 DNA采集与提取 8

3。2。1 DNA采集 8

3。2。2 DNA提取 8

3。3 引物设计 8

3。4 聚合酶链式反应(PCR) 9

3。4。1步骤: 9

3。4。2 PCR条件 10

3。4。3 PCR反应体系(30ul) 11

3。5 琼脂糖凝胶电泳 11

第四章 实验结果 12

第一章 引言

1。1背景介绍

1。1。1基因敲除源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766

    基因敲除技术,也被称为基因靶向性,是指一种遗传工程技术,根据序列已知但功能未知的基因,将他们转移到别的基因,使那些基因是去某些功能和特性,然后再转移到模式生物内,观察模式动物的形态行为,来直接对基因对机体产生的影响进行研究,随着科技的发展,除了同源重组技术的应用,新的基因插入突变技术和iRNA也开始被应用,他们也可以达到基因敲除的目的。

    基因敲除主要包括下列技术:①构建重组载体;②同源干细胞的筛选 ③动物模型的建立;④将重组DNA转入受体细胞核内。

基因敲除载体通常包含两个区段和靶同源性侧翼区,不同的来源和为了不同的目的序列,具有用于药物筛选的标记作用 ,用于构建基因靶向策略的载体通常具有两种插入载体形式:①位于同源序列的断裂位点,选择与其相邻的同源目的序列的基因,载体DNA同源序列和同源重组的染色体靶位点,整合载体后进入染色体靶点,②置换载体:断裂位点位于同源染色体序列的外部或两侧,同源基因的选择位于靶序列内部或外部,DNA序列和同源载体与染色体有两个同源重组靶位点,发生同源序列载体置换染色体靶序列。

1。1。2实现基因敲除的多种原理和方法

    ①利用基因同源重组进行基因敲除:基因载体的构建;细胞的获得;同源重组;选择筛选已击中的细胞;表型研究;得到纯合体。通过同源重组消除细胞或动物中靶基因的活性。

    ②诱导性基因敲除法:常见的几种诱导性类型有:四环素诱导型;干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型,该方法使用一些随机插入的病毒,细菌或其他基因载体的基因序列,根据细胞的不同,插入载体的选择也有所不同。逆转率病毒可用于动植物细胞的插入;噬菌体可用于细菌基因敲除。

    ③利用随机插入突变进行基因敲除:此法利用某些能随机插入基因序列的病毒,细菌或其他基因载体,在目标细胞基因组中进行随机插入突变,建立一个携带随机插入突变的细胞库,然后通过相应的标记进行筛选获得相应的基因敲除细胞[8]。 

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