DNA小分子检测方法主要有荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术、焦磷酸测序技术、肽核酸探针技术、基因芯片技术等,由于生物分子自身的荧光较弱,目前多采用荧光探针法检测,荧光分析法因其选择性好、灵敏度高、动态响应范围宽以及测定条件更接近生命体的生理环境的优点应用十分广泛[29]。荧光探针技术是利用物质的光物理和光化学特性,在分子量级上研究溶液中生物分子高灵敏度的分析方法,因而近年来,随着技术的不断进步,荧光探针法作为一种检测新型的定量检测方法。以其干扰少、快速、灵敏度高、准确、实用性而备受关注。
2.2 主要仪器和试剂
2.2.1 仪器和设备
①Steady-State/Time-Resolved Spectrofluorometer 荧光分光光度计 FLSP920;
②Thermomixer Comfort 恒温混匀仪;
③Ultrasonic Cell Disruptor HN96-II。
④Affimag 磁分离架 1.5ml 微离心管×12孔
⑤万分之一电子天平
2.2.2 试剂
①Affimag FEO Magnetic Microspheres 四氧化三铁磁性微球(带氨基)(天津倍思乐色谱技术开发中心);
②Glutaraldehyde 戊二醛 AR,50% in H2O (阿拉丁)。
③TE缓冲液 Tris-EDTA Buffer (海利克思);PBS缓冲液。文献综述
④氰基硼氢化钠 NaBH3CN(配制约20mM的溶液);氧氯化锆 八水合物(ZrOCl28H2O)(sigma公司); Polygalacturonic acid potassium solt多聚半乳糖醛酸钾盐(配制成饱和溶液)。
⑤1×10-4M吗啉:5’-NH2-(CH2)11-AAC CAT ACA ACC TAC TAC CTC A-3’。
⑥实验组:完全配对的10-10M DNA序列
5’-TGA GGT AGT AGG TTG TAT GGT T-3’;
对照组:完全不配对的10-10M DNA序列。
⑦无水乙醇(配制60%的乙醇溶液);高碘酸钠,AR;银氨溶液 0.1M。
⑧醋酸缓冲液0.2M NaAc/HAc缓冲液 PH约为4。