本实验对徐淮山羊胎羊进行组织采样，探讨HAND2基因在其各组织中的表达进行比较分析。HAND2是BHLH蛋白家族的重要成员，与胚胎心脏发育密切相关。BHLH蛋白家族具有极其重要的意义，它是一种转录因子，在山羊心脏形成的过程中扮演者不可或缺的角色。HAND蛋白的作用范围较为广泛，在心管尚未形成时和心管形成之后在心脏发育的所有过程都有所表达。众多研究者通过鸡胚与鼠胚的实验结果得出，HAND2不论是在胚胎的心脏形成、血管生成还是在肢体等其他部分的发育过程中，具有不容忽视的重要意义[2-4]。沈磊等研究表明HAND2 基因可能在先心病患者的发病机制中发挥一定的作用[5]。孙淑娜等研究人员发现HAND2的作用还体现在斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节的发育过程中[6]。吴瑕等研究人员研究发现，妊娠期糖尿病母鼠所育的胎鼠，出现心脏发育异常的概率升高很显著； HAND2mRNA及蛋白在妊娠糖尿病胎鼠 E12 和E15的心脏表达水平显著性下降，这暗示与GDM 胎鼠的心脏发育有异常相关性[2]。

本实验主要研究HAND2基因在徐淮山羊的各组织间的表达量及差异，有何显著差异及相关性，在此之前虽有很多文章是研究HAND2基因的，但并无徐淮山羊胎羊组织的表达量，研究最多的当以斑马鱼，斑马鱼是近年来新兴进行基因功能研究的首选模式生物[6]，但是HAND2在当地品种中又以什么样的结果示人，研究过程中是否会有新的发现，我们不得而知，借此来了解HAND2基因的结构功能。

2 实验过程及方法

2.1实验过程

采集组织块 → 提取总RNA → 反转录 → RT-PCR → 数据处理 → 分析结果 → 论文。

2.2实验材料

2.2.1实验样本的采集

   采集徐淮山羊胎羊的各部分组织块，心、肝、脾、肺、肾、肠、背、腿（一般称重为0.2g以上）放置于冰冷的生理盐水中漂洗，拭去组织间隙中的血液，包裹于滤纸中吸干，准确称量，放入冻存管或离心管中-20度可以保存3个月，-80℃可以保存半年。来,自|优;尔`论^文/网www.youerw.com

2.2.2实验仪器与设备

实验仪器与设备见表2-1

2.2.3实验试剂

    液氮、RNAiosplus（裂解液）、氯仿、无水乙醇、异丙醇、75％乙醇、RNase-free水、Taq酶、琼脂糖、TBE缓冲液、核酸染料、SYBR荧光染料、PCR试剂盒、反转录试剂盒：①gDNA Eraser ②5*gDNA Eraser Buffer ③prime suipt RT Enzyne mirl④5*prime suipt Buffer2 ⑤RT Prime mix ⑥RNase Free dH2O

表2-1 实验仪器与设备

Table2-1 Experimental apparatus and equipment

仪器名称 型号 生产厂家或地址

高速冷冻离心机

超净工作台

电热恒温水浴锅

Eppendorf移液器系列

紫外分光光度计

超低温立式冰柜

掌上离心机

电子天平

制冰机

PCR仪

微波炉

荧光定量PCR仪

台式高速离心机

电泳仪

普通冰箱 3-18K

SW-CJ-1B

21-6

200μL，100μL，20μL，10μL

NANODROP 2000C

MDF-382E

WTL

BP211D

FM70A

GeneAmp® PCR System 9700

WD700

CFX96

1-13

DYY-12型

BCD-257SL SIGMA公司

苏州

江苏常熟

德国

GBC公司

日本三洋

中国

德国Sartorious

中国格兰特

美国应用生物系统公司