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2.3实验步骤

2.3.1提取组织块的总RNA

（1）将剪刀、镊子、研钵等工具蘸上酒精并点燃杀菌，用实验托盘称取适量的样品加入冷却的研钵中并不断加入液氮进行研磨，直至粉末状之后加入1mL的 Trizol试剂。（如果标本的量超过Trizol容积的10%，就会使得DNA被污染）置于15-30℃环境温度下静置5分钟，目的是完全分离核蛋白复合体。（或-70°C过夜后再进行）

（2）将研钵里的样本移取到EP管中，用移液器反复吹打数次，室温静置5min，在高速低温离心机中离心（12000r/min，4℃)5min。

（3）离心管从离心机中取出后，取出另一小管，移取离心管中的上层水相，加入0.2mL的氯仿，将离心管的盖帽盖紧后双手猛烈摇晃15s（因氯仿具有沸点低易挥发的性质，所以应谨慎振荡离心管，防止盖帽因震荡过猛而弹开）。当离心管中的溶液乳化充分（无分层现象）后，在室温下静置5min之后离心16min。

（4）缓慢地取出离心管，由下往上观察到匀浆液共分为三层，依次为：下层为有色的有机物溶液、中间为乳状蛋白质层、上层为澄清液。移取上清液至另一灭菌离心管中（避免吸出中间层），加入同容积的异丙醇并缓慢吹打使其充分混匀，置于23℃恒温水浴锅中水浴加热10min后并离心10min。