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图2-3 系统发育树分析

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表清单

表序号 表名称 页码

表1-1 使用仪器名称目录 3

表1-2 PCR反应条件 5

表2-1   L菌株的药敏试验 7

绪论

草鱼属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属(Grass carp)。为中国主要淡水鱼类养殖对象。分布于中国各大水系，是国内淡水养殖四大家鱼之一。随着水产养殖业规模化和集约化程度提高，水质日益恶化，爆发性病害逐渐增多，成为制约草鱼养殖业发展的阻碍。目前在水产动物疾病防治过程中主要使用广谱抗生素，虽然抗生素能有效控制病害，但也扰乱了水产环境和水产动物肠道中有益菌群的生长，导致水产动物免疫力下降及病原菌耐药性增强，更为严重的是，抗生素在水产动物体内残留富集，最终危及人类健康。

为避免抗生素不良影响，人们找寻各种替代方法，益生菌制剂是一个重要的替代途径。益生菌制剂(Probiotics)又称微生态制剂(Microbiol ecological agents)，是通过改善肠道菌落生态，提高宿主免疫水平的益生菌及其生长代谢产物制品。肠道益生菌制剂能够维护宿主肠道优势菌落，抑制病菌生长繁殖，有益于宿主的健康生长。文献综述

水产养殖中益生菌来源一直有较大争议，为使益生菌在其比较适应的环境里更好地生长繁殖发挥效应，一般认为从水生动物肠道或其水生环境筛选的菌较合理。

本研究从草鱼肠道中分离获得一株细菌，并进行形态学、生理生化以及16S rDNA测序等系统鉴定，鉴定结果为不动杆菌（Acinetobacter xiamenensis）。不动杆菌属（Acinetobacter)为莫拉氏菌科（Moraxellaceae)非发酵革兰氏阴性菌。目前已经确定不动杆菌属有32个种,在自然界广泛存在[1]。

目前关于不动杆菌属种类的研究多集中在鱼类病原菌，其中鲍曼不动杆菌能够感染鳜鱼，且近年来鲍曼不动杆菌频繁引起院内感染，耐药菌株不断增多，因此其被广泛关注[2]。琼氏不动杆菌危害锦鲤，陈翠珍等[3]从锦鲤中分离出琼氏不动杆菌。缺乏对不动杆菌（Acinetobacter xiamenensis）的相关研究，没有研究表明不动杆菌（Acinetobacter xiamenensis）是致病菌。

有研究者在健康养殖的黄颡鱼肠道菌优势菌群中分离出不动杆菌属[4]。由此可知，不动杆菌（Acinetobacter xiamenensis）有可能成为草鱼肠道益生菌剂的组成成分。

本试验以草鱼肠道细菌为研究对象，从中分离获得一株细菌，并进行革兰氏染色、生理生化以及16S rDNA测序等系统鉴定。为草鱼肠道菌落构成及鱼类饲料制备积累科学资料。

1.材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验鱼类：草鱼取自徐州市某市场。

1.1.2实验用培养基、器材及试剂：

（1） LB培养基：胰蛋白胨10g,NaCl 10g,酵母提取物5g,琼脂15g。（规格：1L）

（2） 胰蛋白胨、酵母提取物、琼脂等药品，琼脂细菌生化微量鉴定管及药敏试纸均购自杭州微生物制剂有限公司。

（3） 细菌基因组DNA提取试剂盒、DNA胶回收试剂盒、pMD18-T、Master Mix均购自TaKaRa公司。

1.1.3各种试剂溶液的制备来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

（1）与琼脂糖凝胶电泳相关的试剂制备