1。6菌株的分离纯化论文网

制备样品稀释液，进行平板涂布分离。培养温度30℃，培养时间7d。根据平板上单菌落的颜色，大小，形态等表观特征进行初步筛选，挑取单菌落进行平板划线，反复划线分离3-4次直至获得纯菌株。

1。7产酶活性菌的筛选

将分离得到的菌株分别点种于蛋白培养基和淀粉培养基中，在37摄氏度的保温箱中培养24h，观察每个菌株有无产生水解圈（蛋白酶菌株的培养基产生透明水解圈，淀粉酶菌株在培养基中加入Lugols碘液后显示不变色的水解圈），并测量每个菌株水解圈的直径大小以及和菌落直径的比值（若比值较大则说明该菌种产酶活性较高，反之，若比值较小，则说明该菌种产酶活性较弱）。

1。8菌株的鉴定

1。8。1形态学鉴定

1。8。1。1菌落形态：用划线法于固体牛肉膏蛋白胨培养基上划线，培养24h，得到单菌落，进行菌落形态观察。

1。8。1。2菌体形态

具体步骤：

涂片：取一片干净的载玻片，在载玻片的中央滴一滴蒸馏水，用接种环从培养基中挑去适量的菌种，涂在蒸馏水中，使菌体能够均匀分散地分布于蒸馏水中。

注意：挑取菌的数量要适量，避免水中菌的浓度过高，使得菌体堆积，看不清单个菌体的特征。

干燥：把载玻片放到干净通风的地方，让其自然风光，也可以用吹风机轻轻吹干。

固定：一手拿载玻片，使有菌膜的一面向上，快速通过酒精灯的火焰，三到四次为宜，温度不宜过高。

注意：必须要载玻片完全风干才可以进行固定，可以避免液体受热后温度过高，使得菌体破裂损坏，难以观察。

染色:滴加一滴草酸铵结晶紫溶液，染色2~3min。

冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗载玻片，直到从载玻片上流下的水为无色时为止。

干燥：用吸水纸将多余的水吸干，把载玻片移到干净通风的地方，直到彻底风干。

镜检：在显微镜下观察，从低倍到高倍，最后用油镜进行观察。

1。8。2革兰氏染色

具体步骤：

现将配制好的甲液和乙液混合，静置48h，过滤后使用。（用不完的试剂要保存在棕色瓶中，可以储存数月。）

取一片干净的载玻片，在载玻片的中央滴一滴蒸馏水。用接种环从培养皿中挑取适量菌株，涂布在蒸馏水中。然后进行风干和固定。

滴一滴结晶紫的混合溶液，进行染色1min。之后用蒸馏水轻轻地冲洗干净。

加入碘液反应4min，用蒸馏水轻轻冲洗干净，取吸水纸将多余的水分吸干。

滴加丙酮乙醇溶液进行脱色。（洗脱至流下的丙酮乙醇溶液为无色为止，约要洗40s。）

用番红染液进行复染，染色时间约为3~4min，之后用蒸馏水轻轻冲洗干净，进行风干。

在显微镜下观察，若菌体被染为深紫色，则说明革兰氏染色结果显示该菌为阳性细菌，反之，若，观察得该菌体被染为红色，则说明革兰氏染色结果显示该菌为阴性细菌。

1。8。3生理生化鉴定[6]文献综述

试剂制备

接触酶试剂：4%~10%过氧化氢溶液。V-P试验试剂：40%NaCL和0。3%肌酸。

吲哚试验试剂：95%乙醇：700ml、浓盐酸：150ml、对二甲基氨基苯甲醛：5g。

苯丙氨酸脱氢酶试验试剂：10%的氯化铁溶液。

甲基红试验试剂：甲基红：0。1g、乙醇（95%）：300ml、蒸馏水：200ml。

单染色试剂：草酸铵结晶紫溶液

革兰氏染色试剂：结晶紫混合溶液：甲液：结晶紫：1g、95%乙醇：10ml。乙液：草酸铵：0。4g、蒸馏水：40ml。碘液：蒸馏水：150ml、碘：0。05g、碘化钾：1g。（先取1g碘化钾，加入少量蒸馏水进行溶解，再放入0。05g碘，一起溶解，待完全溶解后，再加入蒸馏水稀释，直到稀释至300ml。）脱色液（丙酮乙醇溶液）：95%乙醇：50ml、丙酮：20ml。④复染液：含2。5%番红的乙醇溶液：10ml、蒸馏水：50ml。