将挑的菌落置于已有2ml的LB培养基（卡那霉素浓度为100µg/ml），200rpm，37℃摇床12-16h。将摇床过后的菌液倒1。5ml置离心管，用碱性裂解法提取质粒。之后进行电泳。然后酶切重组子用XbaⅠ、HindIII进行双酶切，将pCAMBIA-1300与Pact-cel3c分开，酶切后进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。

2。2。6  cel3c基因的序列测定

将β-葡萄糖苷酶cel3c寄去赛百盛基因技术有限公司，由其在DNA自动测序仪上进行测序。

3  结果与分析

3。1  cel3c的PCR扩增

在引物为cel3c-Act-F和cel3c-R将目的基因进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳后得出目的基因片段大小接近3000bp左右，如图2。具体基因序列可见3。9，可得知β-葡萄糖苷酶cel3c的大小为2929bp，由此可见PCR鉴定结果正确。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

3。2Pact的PCR扩增

在引物为cel3c-Act-R和XbaI-F将启动子DNA进行PCR扩增，电泳后得出启动子片段大小在1000kb以上，在1200-1300之间，如图3。具体基因序列可见3。9，可得知启动子的片段大小就在1251bp，电泳检测结果表明得到了预期大小的启动子DNA。