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1。3方法
1。3。1桦褐孔菌的静止培养
1。配制PDA液体培养基,准备50个三角烧瓶,每个瓶子中分装30ml培养液,再进行高压灭菌处理。
2。 每25瓶分为一组,实验组(a)假如22。5g蔗糖,并且加入2,5g化合物,同时加入伴生菌发酵液;而对照组(ck)则加入25g蔗糖,经高温灭菌后待用。
3。 在50瓶培养基在无菌环境下加入0。5ml打碎均匀的桦褐孔菌菌液。
4。 将接好菌的培养瓶放入保温箱中28℃培养。
5.每隔三天分别从对照组和实验组中各随机取样5瓶,分别做好标记为:a1、a2、a3、a4、a5(实验组)、ck1、ck2、ck3、ck4、ck5(对照组),并且还要准备一个空白对照组记为b。
1。3。2 桦褐孔菌的产量论文网
将菌体取出后,用滤纸吸干并充分挤干,放于天平中称取干重,并做好记录。
1。3。3 桦褐孔菌的PH
菌体取出后,用酸度计测量发酵液的pH值,并做好记录。
1。3。4 酶活性测定的方法
1。3。4。1淀粉酶活性测定(Amy酶)
从实验组的发酵培养基中取0。5ml酶液,再从对照组的发酵培养基中取0。5ml酶液,分别依次加入到11支试管中,然后再向各支试管中,用移液枪加入2ml的先前配制好的0。1mol/L且pH为5。6的柠檬酸缓冲液(其中含有1%淀粉),充分摇晃均匀后将试管放入到水浴锅中,在锅中维持水浴状态30 min后将试管取出来,为了能钝化淀粉酶的活力,试管取出来后迅速向每个试管中加入1。5 mL 的DNS 试剂,从而终止反应。紧接着我们再将试管置于沸水中维持煮沸的状态10 min后,在显色反应结束后,取出后用移液管移取1。0ml的蒸馏水分别加到每支试管中,在确保溶液冷却之后充分振荡使溶液混匀。按照实验要求,在540nm的波长条件下,依次测量各试管中溶液的吸光度值并做好实验记录。本实验的空白对照组b是用蒸馏水代替酶液。