1。1。4标准品和试剂

      葡萄糖，蔗糖，无水乙醇，抗坏血酸，乙酸乙酯等均为分析纯。

1。2实验仪器

仪器名称 型号 厂家

洁净工作台 VS-840-1 上海博讯实业有限公司医疗设备厂

高压灭菌锅 MLS-3020 SANYO Electric Co。,Ltd

电热恒温培养箱 DNP-9052 上海精宏实验设备有限公司

超声波清洗器 KQ-250E 昆山市超声仪器有限公司

微波炉 Galanz WD700 佛山市顺德区格兰仕电器有限公司

电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9070A 上海精宏实验设备有限公司

台式低速离心机 TD5A-WS 长沙湘仪仪器有限公司

电子分析天平 BS110S Sartorius公司

恒温培养震荡器 ZWY-2012 上海智诚分析仪器制造有限公司

96孔细胞培养板 FCP962 美国Gibco公司

旋转蒸发仪 RE-52A 上海亚荣生化仪器厂

荧光检测仪 SpectroMax M2 Molecular Device公司

电磁炉 IC TW 2014 江苏松桥电器有限公司

1。3方法

1。3。1 桦褐孔菌内生菌的液体培养[8]

（1）配制PDB培养基7 L，分装在27个500 mL锥形瓶中，每瓶250 mL，灭菌。

（2）用灭过菌的一次性竹签挑取少许菌丝接种于培养瓶中，一共9株菌：A、B、C、F、J、L、M、O、Q，每株接3瓶。

（3）将接种好的培养瓶置于28 ℃，120 r/min的恒温培养震荡器内震荡培养7天。文献综述

1。3。2 发酵液和菌丝体有效成分的提取

    （1）采用抽滤的方法将发酵液和菌丝体分离

    （2）发酵液用等体积乙酸乙酯萃取，热回流循环提取，所得液体减压浓缩得浸膏，4 ℃保藏待用

（3）过滤的菌丝体干燥后粉碎，加入适量乙酸乙酯浸提7天，热回流循环提取，所得液体减压浓缩得浸膏，4 ℃保藏待用；粉碎后的菌丝体再加入95%乙醇浸提7天，热回流循环提取，所得液体减压浓缩得浸膏，4 ℃保藏待用 。

1。3。3 抗氧化活性实验

     采用DPPH自由基清除法[9]。将菌丝体乙醇提取物用50%的乙醇配制成1 mg/mL的受测液。517 nm波长处测各个孔的吸光度，其中，100 μL受测液+100 μL DPPH溶液的吸光度（A0），100 μL DPPH溶液+100 μL 50%乙醇溶液的吸光度（A1）和100 μL受测液+100 μL 50%乙醇溶液的吸光度（A2）。选用Vc作为阳性对照。避光操作，测得数据，并按式（1）计算DPPH自由基清除率。

      DPPH自由基清除率（%）= [A1 –(A0 –A2)]/ A1    ×100%               （1）

1。3。4 抑制病原真菌实验

     采用菌丝生长速率法[10]。实验前，将保藏试管中的真菌病原菌转接至PDA平板复壮。待每种真菌菌落长到可用4 mm打孔器打出30个菌饼即可。准确称量干燥的有机溶剂萃取物0。1 mg，液配制成浓度为0。1 mg/mL的50%乙醇溶液。别吸取1 mL溶液+9  mL PDA培养基加到无菌培养皿中，轻晃混匀。以无菌水作为对照。在无菌条件下，将供试菌用灭菌后4 mm的打孔器打出菌饼备用。用接种针小心将菌饼放置在上述培养基上，菌丝一面向下。同时做三个重复，按等边三角形排列在皿中央。然后加盖做好标记，置26 ℃温箱中培养，待对照组菌落边缘长到即将接起时，测菌落直径（采用“十”字交叉法减小误差）。对照组菌落生长直径（D1），处理组菌落生长直径（D2），菌饼直径（D3），按下式(2)计算菌丝抑制率。