摘要：本研究提取了大肠杆菌基因组，利用PCR扩增glgB基因，然后将glgB基因小片段和pUC19/SBD2质粒大片段连接，构建出重组质粒pUC19-glgB。然后对重组质粒进行双酶切验证，对酶切验证正确的质粒pUC19-glgB进行DNA测序。结果表明克隆的大肠杆菌glgB基因的大小为2181bp，编码727个氨基酸，其核苷酸序列与已经报道的glgB基因(登录号：M13751。1) 序列的同源性达99。9%。最后将该基因插入到pBIN19/SBD2质粒中，构建出植物表达载体pBIN19-glgB。78910

毕业论文关键词：大肠杆菌，glgB基因， PCR扩增，植物表达载体构建

Abstract: In this experiment we extract the Escherichia coli genome and amplificate glgB gene by PCR, and connect the small fragments of glgB gene and the big fragments of plasmid pUC19/SBD2 gene, and construct the recombinant plasmid pUC19-glgB。 Then we verify the correct DNA sequencing of the plasmid pUC19-glgB by double enzyme digestion。 Results showed that the cloned glgB gene of Escherichia coli is 2181bp in size, code 727 amino acid, nucleotide sequences compare with glgB gene have been reported (login: M13751。1), sequence homology of 99。9%。 Finally, the gene is inserted into plasmid pBIN19/SBD2, construction of a plant expression vector pBIN19-glgB。

Key words: Escherichia coli, glgB genes, PCR amplification, construction of plant expression vector

目录

前言 - 5 -

1 材料与方法 - 6 -

1。1 材料 - 6 -

1。1。1 质粒与菌株 - 6 -

1。1。2　酶与试剂 - 6 -

1。1。3  培养基 - 6 -

1。2 方法 - 6 -

1。2。1 大肠杆菌基因组DNA的提取 - 6 -

1。2。2  大肠杆菌glgB基因的PCR扩增 - 7 -

1。2。3  构建重组质粒pUC19-glgB - 7 -

1。2。4植物表达载体pBIN19-glgB的构建 - 7 -

2  结果与分析 - 8 -

2。1大肠杆菌glgB基因的克隆及分析 - 8 -

2。2植物表达载体的构建 - 10 -

3  结论 - 11 -

参考文献 - 12 -

致 谢： - 14 -

前言

糖原是由D-葡萄糖通过α(1-4)糖苷键和α(1-6)糖苷键连接形成的高分子聚糖[1]。糖原在原核生物中的作用尚不完全清楚，细菌中的糖原合成是多酶参与的代谢途径，glgC编码腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGPase)，AGPase以一磷酸葡萄糖为底物催化合成腺苷二磷酸葡萄糖，后者为糖原合成的底物。glgA编码糖原合成酶(glycogen synthase, GS)，GS以腺苷二磷酸葡萄糖为底物，代谢合成葡萄糖苷引物与葡萄糖分子间的α(1-4)糖苷键形成；glgB编码的糖原分支酶(glycogen branching enzyme,GBS)，GBS以腺苷二磷酸葡萄糖为底物合成葡萄糖苷引物与葡萄糖分子间的α(1-6)糖苷键[2-4]。

大肠杆菌中glgB编码糖原分支酶GBE，GBE是原核生物中催化调控α (1-6)的分支合成的关键酶[5]，大肠杆菌GBE底物为5-16个葡萄糖苷链，分支密度高于植物淀粉[6]。

淀粉是葡萄糖的高聚体，可分为直链淀粉(糖淀粉)和支链淀粉(胶淀粉)。前者为无分支的螺旋结构；后者以24~30个葡萄糖残基以α-1,4-糖苷键首尾相连而成，在支链处为α-1,6-糖苷键。直链淀粉是由蜡纸(waxy)基因编码的淀粉粒结合淀粉合成酶(GBSS)催化形成的，而支链淀粉的合成则主要是由淀粉分支酶(SBE)控制的[7-8]，在淀粉合成过程中起着重要作用，而淀粉中直连淀粉和支链淀粉的含量与比例决定淀粉的性质进而影响其应用[9]，支链淀粉的合成调控一直受到人们的关注[10]。文献综述