摘要查尔酮合成酶(Chalcone synthase,CHS)是类黄酮合成途径中的一个关键酶。 CHS 表达量的多或少都可能导致植物花色的变异。本实验利用 PCR 方法克隆查 尔酮合成酶基因(CHS)的 cDNA，通过双酶切法，利用粘性末端连接，构建在植 物中表达 CHS 的 pRI101-CHS 植物表达载体。以矮牵牛无菌苗叶片作为转化受 体材料，建立了农杆菌介导的矮牵牛遗传转化体系。利用农杆菌介导法将桑树查尔酮合成酶基因（CHS）转入矮牵牛中，抗性植株经 PCR 检测均为阳性植株， 初步表明桑树 CHS 基因已整合到矮牵牛基因组中。结果表明（1）以紫色桑叶为 材料，提取 RNA，逆转录成 cDNA 后用特异引物 PCR 法克隆出 1181bp 的 CHScDNA 片段。（2）将克隆的 CHS 片段与植物表达载体 pRI101 分别酶切， 通过粘性末端连接后，获得植物表达载体。（3）建立了矮牵牛的基因转化受体 系统。（4）建立了农杆菌介导的矮牵牛遗传转化体系。80971

毕业论文关键词：桑树查尔酮合成酶基因；矮牵牛；植物表达载体构建；PCR 检测

Abstract Chalcone synthase (CHS) is a key enzyme  in the  biosynthesis  of flavonoids。 The increase or decrease of CHS expression may lead to the mutate of flower color。 The cloning of chalcone synthase gene by the method of PCR (CHS) cDNA, then double enzyme digestion method, connection by the viscous end, pRI101-CHS plant expression vector was constructed to express CHS in plants。 In Petunia sterile  leaves as recipient material, establish the petunia genetic transformation system agrobacterium mediated。 The mulberry chalcone synthase gene (CHS) was transformed by Agrobacterium mediated method into the petunia , The resistant plants detected by PCR were positive plants,  it showed that CHS  had  been integrated into the petunia genome。 The main results are as follows:(1)According to the purple mulberry leaves as material extracte RNA, after reverse  transcription  into cDNA, CHS cDNA fragment amplified by PCR with specific primer 1181bp;(2)The CHS fragment and its plant expression vector pRI101 were digested,  after the  cohesive ends are attached, then we get the plant expression vector;(3)The establishment of the petunia gene transformation receptor system;(4)The establishment of Petunia genetic transformation  system  agrobacterium  mediated。

Keywords: Mulberry chalcone synthase gene ; Petunia; Construction of plant expression  vector;  PCR detection

目 录

第一章 绪论 1

1。1  基因克隆得到花色变异植株 1

1。2  花青素的研究概况 2

1。2。1  花青素 2

1。2。2  花青素的生物合成途径 3

1。3 CHS 研究概况 4

1。4  矮牵牛作为转化受体材料的研究概况 6

1。4。1  矮牵牛简介 6

1。4。2  矮牵牛花色研究 6

1。4。3  矮牵牛遗传转化 6

1。5  问题与展望 7

1。6  研究的目的和意义 8

第二章 材料与方法 10

2。1  材料与试剂 10

2。1。1  材料 10

2。1。2  试剂 10

2。1。3  其他