目前，在日本和韩国有专门的实验室用于培育冰菜，在国内仅在云南、青岛及西安等地有规模化的种植。而关于冰草组织培养的报道较少，对冰草的研究主要集中在室外土耕栽培和水耕栽培上，且仅有张洪磊，刘孟霞、黄渊军、Agarie S等人对冰草特性和种植技术进行过介绍和概括。在对冰草的培育工作中，室外播种育苗受外界环境因素及取材影响甚大，而组织培养不受季节、气候等因素的制约，节约土地，便于集约化管理和工厂化生产；需要的原材料少，可在短期内快速获得大量生长均匀、遗传性状相同的健壮苗木等[6-8]。但因为对冰草组织培养快繁技术进行系统研究的很少，所以在所查阅的涉及冰草组织培养的文献中，都存在增殖继代生长慢、时间长的问题。如今，越来越多的人认识到冰草的优良特点，故日后必将有更多的人对冰草的组织培养进行研究，也将为扩大加快冰草繁殖、进一步建立冰草遗传再生体系和工厂化育苗、冰草的杂交育种、冰草新品种的培育提供良好的技术支持和开辟新的途径。本文对冰草快速繁殖进行了较为系统的研究。

1 材料与方法

1。1 供试材料

非洲冰草种子

1。2试验方法

1。2。1 冰草种子的消毒

取适量冰草种子，在超净台上用75% 的酒精浸泡35 s，用无菌水漂洗3次，转入0。1%升汞溶液中灭菌不同时间，分别为1min，1min30s，2min，用无菌水漂洗3～4 次。

1。2。2冰草种子育苗培养基

基本培养基为2。0mM CaCl2、1。5mM MgSO4、1。0mM KH2PO4、MS铁盐、MS微量元素、6%琼脂粉，添加0 mmol/L至4。0 mmol/L的KNO3，设计5 个浓度梯度。pH 5。8，121℃，0。1~0。15 MPa条件下高温、高压灭菌20 min。具体KNO3浓度梯度如下：

1号培养基   基本培养基＋0 mmol/L KNO3

2号培养基   基本培养基＋1。0 mmol/L KNO3

3号培养基   基本培养基＋2。0 mmol/L KNO3

4号培养基   基本培养基＋4。0 mmol/L KNO3

1。2。3接种

在超净台上，将消毒过的冰草种子均匀接入四种不同的种子萌发培养基，每瓶接种10粒种子，每种培养基接种15瓶。培养温度25 ℃，先暗培养两天，之后进行光培养，每天光照14 h，光照强度1500～2 000 lx。然后定期的观察、测量，统计污染率、萌发率、幼苗株高。文献综述

1。2。4组织培养

继代增殖分化培养基：基本培养基为1/2MS，20g/L糖，6g/L琼脂粉，添加不同浓度、不同浓度配比的激素，pH 5。8，121℃，0。1~0。15 MPa条件下高温、高压灭菌20 min。

1号培养基基本培养基＋0。25mg/L BA

2号培养基基本培养基＋0。50mg/L BA

3号培养基基本培养基＋1。00mg/L BA

4号培养基基本培养基＋0。25mg/L BA＋0。5mg/L NAA

5号培养基基本培养基＋0。5mg/L BA＋0。5mg/L NAA

6号培养基基本培养基＋1。0mg/L BA＋0。5mg/L NAA

种子萌发培养15d后，在无菌条件下，将生长发育良好幼苗的顶芽与下胚轴分离，分别将其接入不同的继代增殖分化培养基。顶芽接入1-3号继代增殖分化培养基培养基，下胚轴切段接入4-6号培养基，每瓶接种6个外植体，顶芽每种分化培养基接种30瓶，见光培养，下胚轴每种分化培养基接种15瓶，且下胚轴切成2㎝左右大小并避光培养。在培养20d、35d时，1-3号培养基记录苗高、丛生芽数、玻璃化率，4-6号培养基记录愈伤组织形成率、愈伤组织生长状况。

1。3。5愈伤组织的形成和顶芽增殖

激素、营养对冰草芽增殖及玻璃化的影响

培养基：基本培养基为MS培养基，MS培养基的铁盐、微量元素和有机物，10。0mM KNO3，2。0mM CaCl2，1。5mM MgSO4·7H2O，1。0mM KH2PO4，蔗糖20g/L，琼脂6g/L，添加不同浓度的6-BA，pH 5。8，121℃，0。1~0。15 MPa条件下高温、高压灭菌20 min，用透气的塑料瓶分装。