1号培养基基本培养基＋0。25 mg/L BA

2号培养基基本培养基＋0。50 mg/L BA 

3号培养基基本培养基＋1。00 mg/L BA

组织培养35d后，将诱导分化出的不定芽切成单芽接种到添加不同质量浓度6-BA的增殖培养基中培养，下胚轴继代培养放入恒温培养室。其中顶芽继续见光培养，下胚轴暗培养。每35d继代1次，观察每次顶芽增殖和玻璃化程度和下胚轴愈伤组织的分化情况，记录苗高、丛生芽数、玻璃化率、愈伤组织形成率、愈伤组织生长状况。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

2  结果与分析

2。1  升汞灭菌时间对冰草种子萌发的影响

植物组织培养要求对外植体进行无菌培养，所以必须对来自有菌空间的植物离体组织或器官进行消毒灭菌，这时就要做到既要把外植体表面的微生物彻底杀死，又不伤害其组织和表层细胞，从而获得不污染且存活的外植体。种苗污染大致上可归为四方面的原因:○1种子灭菌效果不好；○2培养基灭菌不彻底；○3实验操作不当；○4空气带菌。其中影响最大的是种子的灭菌效果。由于植物种子在其生长发育过程中容易受到自然界各种细菌和真菌等微生物的侵染，种子不仅表面带菌，而且内部也可能被感染，因此对种子进行彻底的灭菌非常重要，但也比较困难[15-19]。一般常用的灭菌试剂有: 75%酒精、0。 1%升汞、3%～ 4%次氯酸钠等。其中升汞被用作消毒剂已经有百年历史，1∶(500～2 000)的升汞溶液对多数细菌有灭菌作用。由于升汞灭菌效力比较强，毒性也较大，不同植物种子对其有不同的耐受能力，所以种子消毒时间过长，灭菌效果虽然好，但种子萌发率会降低[18]。在本试验的1号育苗培养基中，用0。1%的升汞处理1min，种子萌发率最高（表1）；在2号培养基中，用0。1%升汞处理1。5分钟，种子萌发率最高（表2）；在3号育苗培养基中，用0。1%的升汞处理1min，种子萌发率最高（表3）；在4号育苗培养基中，用0。1%升汞处理1。5分钟，种子萌发率最高（表4）。比较3种不同的灭菌效果可总结出，冰草种子在不同的营养条件下，用0。1%的升汞处理1-1。5min较适宜，灭菌效果较好，幼苗株高没有明显差异。