Keyword: Germacrene A synthase; β-Elemene; Rite-Directed Mutagenesis; GC-MS

目录

1。引言 5

1。1莴苣及吉马烯A合酶的简介 5

1。2榄香烯的简介 6

1。3β-榄香烯的生物合成途径 6

1。4倍半萜合酶的定点突变研究 7

1。5定点突变技术 8

1。6本研究目的及其意义 8

1。7本研究的技术路线 9

2。实验部分 9

2。1 实验材料及试剂 10

2。1。1 植物材料 10

2。1。2 菌株和质粒 10

2。1。3 仪器设备 11

2。1。4试剂及试剂盒 12

2。2 实验操作方法及步骤 13

2。2。1 提取BL21-PET-28a-Lsgas质粒DNA 13

2。2。2  PCR扩增突变质粒PET-28a-Lsgas 13

2。2。3 去掉模板质粒DNA 14

2。2。4 转化Trans5α感受态细胞源Y于U优I尔O论P文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201-8766 ，筛选阳性克隆子做菌落PCR扩增 15

2。2。5 突变质粒DNA提取 15

2。2。6 转化BL21感受态细胞，筛选阳性克隆子做菌落PCR扩增 16

2。2。7 突变质粒的大肠杆菌表达及蛋白SDS-PAGE分析 16

2。2。8 气相检测突变产物 17

3。结果与讨论 17

3。1提取BL21--Lsgas质粒的验证 17

3。2突变质粒PET28a-Lsgas-T412S的构建 18

3。2。1 PCR扩增突变质粒PET-28a-Lsgas的验证 18

3。2。2 Lsgas-T412S转化Trans5α感受态细胞 19

3。2。3 突变后质粒Lsgas-T412S的验证 19

3。2。4 LSGAS-T412S突变质粒转化BL21感受态细胞 20

    3。3突变质粒PET28a-Lsgas-DE的构建 21

        3。3。1 LSGAS-DE突变质粒转化BL21感受态细胞 21

    3。4突变质粒PET28a-Lsgas-Y530F的构建 21

3。4。1 LSGAS-DE突变质粒转化BL21感受态细胞 22

3。5突变后的吉马烯A合酶SDS-PAGE分析 22

3。6气相检测结果 23

4总结与展望 25

参考文献 26

致谢 27

1。引言

1。1莴苣及吉马烯A合酶的简介来自优Q尔W论E文R网wWw.YouERw.com 加QQ75201.8766

莴苣（Lactuca sativa）又名生菜、莴笋、千金菜，为菊科莴苣属，一年或二年生草本植物。[ ]。莴苣属植物所含化学成分比较丰富。主要包括萜类、甾醇、黄酮及苷类等等[2]。莴苣属的生理活性成分主要集中在倍半萜类化合物上 [ ]。因此，这部分也一直是研究的热点和重点。