壳聚糖-果香型精油涂膜的抑菌效果及效构关系研究(6)
2.1.4实验试剂
壳聚糖（生化试剂BR,脱乙酰度：80.0%-95.0%）、吐温-80（化学纯CP）、甘油（分析纯AR）、无水乙醇（分析纯AR），均购于上海国药集团过夜股份有限公司。
纯化琼脂粉（分析纯），购于上海中科昆虫生物科技开发有限公司。
葡萄糖（分析纯），购于上海润洁化学试剂有限公司
2.1.5实验仪器
表2-1试验中用到的主要仪器设备
Table 2-1Main instruments and equipments used in the test
名称
规格 生产厂家
立式压力整齐灭菌锅 LS-B50L 上海医用核子仪器厂
生化培养箱 SPX-150B-Z 上海博讯实业有限公司医疗设备厂
电子天平 MP200B 上海精科实业有限公司
血球计数板 XB-K-25 玉环县求精医用仪器厂
光学显微镜 XST-2CA 上海彼爱姆光学仪器制造有限公司
手持式硬度计 GY-1 乐清市艾德堡仪器有限公司
手持式折光仪 WYT-1 成都青羊联合光学仪器成套部
移液枪 0.5-10μl、20-200μl、100-1000μl 上海康敏检验设备有限公司
2.2 实验方法
2.2.1不同浓度冷榨桔子油和蒸馏桔子油对意大利青霉的抑菌活性
用菌块扩散法进行体外抑菌实验[Ameziane et al. (2007)[23]。将融化的PDA培养基冷却到60℃，用移液枪吸取10、50、100、150、200、250μl的桔子精油加入到培养基中，充分混合，使最终浓度为100、500、1000、1500、2000、2500μl/L。将混合了精油的PDA培养基倒入培养皿（规格为9mm）。把培养了5-10天的青霉，用打孔器切下直径5mm菌块。将均可放入培养皿中央，培养皿用Para film胶带密封防止水分蒸发。培养皿放在28℃中恒温培养5d。观察菌落生长情况并测定菌斑大小，根据公式（1）计算抑菌率，每个处理含有3块培养皿，试验重复一次。
%抑制率（MGI）=(C –T)/C╳100% （1）
C:空白对照菌落直径（mm） T:含有精油的PDA培养皿菌落直径（mm）
2.2.2植物精油、壳聚糖以及壳聚糖植物精油的结合处理对意大利青霉的影响
打孔器在橙子表面制造伤口，每个伤口直径为5mm,深约3mm。每个伤口分别加入1%壳聚糖、1000μl/L蒸馏型桔子精油、1000μl/L冷榨型桔子精油、1%壳聚糖+1000μl/L蒸馏型桔子精油、1%壳聚糖+1000μl/L冷榨型桔子精油，对照为无菌水，然后在每个伤口上接种30μl浓度为5╳104spores/ml浓度的意大利青霉包子悬浮液。伤口晾干后将橙子用塑封带包好，放入塑料筐中，在室温中培养，每天观察橙子采后青霉病的发病率和病斑直径。每个处理含有个伤口，实验重复一次。
发病率=腐烂伤口数/总伤口数╳100% （2）
2.2.3壳聚糖与植物经验结合处理对橙子贮藏期间品质的影响
硬度测定
采用手持式硬度计来测定果实的硬度（Lx-A型邵氏橡胶硬度计，2000）。 每个处理取含2个样品，分别在样品的顶部、底部及赤道位置用手持式硬度计垂直压入水果内进行测量，深度约10mm，取平均值，每个处理含有3个平行，实验重复一次。
总可溶性固形物测定
采用手持折光仪来测定果实的总可溶性固形物含量。使用前，手持折光仪需要进行校零：打开手持式折光仪盖板，用干净的纱布或者卷纸小心擦干棱镜玻璃面。在棱镜玻璃面上滴2滴蒸馏水，盖上盖板。于水平状态，从接眼部处观察，检查视野中明暗交界线是否在刻度的零线上。若于零线不重合，则旋动刻度调节螺旋，使分界线面刚好落在零线上。