双子叶植物RANi载体的Gateway改造(2)
Gateway技术是Invitrogen的专利，它是基于噬菌体的位点特异性重组反应，在目的片段添加重组位点，将PCR产物与含重组位点的供体载体混合进行BP反应获得入门载体(entry clone)，入门载体可以和不同用途的目标载体进行LR反应获得相应的表达载体[8]。本研究以植物表达载体pCambia2301和pHANNIBIAL载体为基础，构建了具有绝大多数双子叶植物转化载体采用的花椰菜花叶病毒35S强启动子Gateway载体重组功能区域的植物RNAi载体 [9]。
1.材料与方法
1.1主要材料
1.1.1 所用载体：
pCambia2301、pHANNIBAL、 pDONR207， pBS-Gateway-rfA 来自Thermal（Invitrogen）
1.1.2 菌株：
大肠杆菌DH5α、大肠杆菌DB3.1感受态细胞由周口师范学院植物遗传与分子育种实验室提供。
1.1.3 酶及试剂：
T4DNA连接酶和内切酶购自NEB公司；2×PCR购自北京康润生物技术公司；DNA Marker购自北京全式金生物技术公司；质粒提取试剂盒和胶原回收试剂盒购自艾德莱生物科技公司。
1.2 主要设备
高速离心机；培养箱；水浴锅；电磁炉等。