PPP1CB 基因可编码蛋白磷酸酶(PP1)的一个亚基,PP1是重要的丝-苏氨酸蛋白磷酸酶,拥有很多亚基,可以组成多种全酶,作用和蛋白激酶相反,主要使蛋白质脱磷酸[3]。根据丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶理化性质可把这些酶大致分成4类:PPP1,PPP2A,钙调磷酸酶(PPP2B)和Mg2+依赖型磷酸酶(PPP2C)。PPP1(PPP1C),PPP2A(PPP2AC)和 PPP2B的催化亚基属于一基因家族,拥40%相似的基因序列,没有与PPP2C结构相似的序列[4]。PPP1有3个亚型:PPP1α,PPP1β,PPP1γ(PPP1γ1 和 PPP1γ2)。在很多的生理活动中:如细胞周期[5]、细胞内的各种糖的代谢、肌肉的收缩等的调节中都起着重要的作用。而国内外对PPP1CB基因与肉质性状相关性的报道甚少。仅有研究表明[6],梅山猪和大白猪的杂交后代中PPP1CB基因的表达水平存在差异,这种差异主要表现出与腰背最长肌的性状有相关性。另外,也有研究显示[7,8],PPP1CB基因与中国西门塔尔牛的肉质性状具有一定的相关性。但关于湖羊P1CB基因的遗传多态性及其与生长性状的相关性未见报道,本研究探讨湖羊P1CB基因的遗传多态性及其与体尺性状的相关性,为湖羊的选种选育工作提供参考依据。

2 材料与方法文献综述

2.1 实验材料 

湖羊(Hu Sheep):从江苏省徐州市铜山区黄集镇大郭庄机场采集湖羊的耳组织80份并采集了其体尺数据。湖羊耳朵组织置于75%乙醇,置于冰盒带回。放到实验室-80℃冰箱中保存用于以后的实验。

2.2实验试剂和溶液

 (1)湖羊耳组织基因组DNA提取液;

 (2)电泳检测DNA所用的缓冲液;

 (3)PCR-SSCP所用缓冲液。

2.3 实验方法

2.3.1 湖羊耳组织的采集和保存

通过选取80只湖羊,每只羊采取适量的耳组织,放在盛乙醇离心小管中,置于冰盒带回。放到实验室-80℃冰箱中保存用于以后的实验。

2.3.2 湖羊的体尺指标的采集

按照《家畜育种学实验指导》[9]中讲解的方法,实验人员使用皮尺,经准确的测量获得每只湖羊的体尺指标数据并对应记录好,带回做好归档。 

2.3.3 湖羊耳组织DNA的提取来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

耳组织DNA的提取使用酚和氯仿按一定的比例进行抽提[10]。 

2.3.4 DNA浓度与纯度的检测及其纯化

每个提取完成的DNA都需要进行质量检测,主要是观察新提取的DNA的纯度,检测其是否能够用于接下来的实验。这个过程需要使用琼脂糖凝胶电泳,观察经过电泳后,DNA的电泳明亮条带是否清楚、是否存在拖尾现象。经过检测,提取的DNA的质量很差,不能用于后面的PCR-SSCP检测,所以需要对进行纯化。纯化DNA所需的材料主要是SanPrep柱式PCR试剂盒。

对纯化完成的DNA溶液进行琼脂糖凝胶电泳检测其纯度及浓度,并根据图像判断是否能够用于后续的实验。

2.3.5 PCR引物设计

此次实验所采用的PCR引物是根据GenBank中绵羊的PPP1CB基因序列(Accession No.:NC_019460.2)而设计的。根据基因序列中所显示的信息,一共设计了5对引物,并将这5对引物命名为:P1、P2、P3、P4和P5,这5对引物所对应的外显子分别为:外显子1、外显子2、外显子3、外显子5和外显子6。每一对引物都有其固定的条件

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