用矮牵牛的 F3H cDNA 克隆基因作为异源探针,从康乃馨、翠菊和树干中克隆 出了相应的 cDNA。用网织红细胞系统的体外表达验证了翠菊和康乃馨的 cDNA 是 F3H 的基因克隆。

④黄酮 3-羟化酶 在已经确定基因型的矮牵牛的花提取物中,已经确定了一个酶的活性,那就是柚

皮素和 3′位点的二羟山奈酚的催化羟基化。控制矮牵牛花 F3′H 活性有两个基因位点, Ht1 和 Ht2。Ht1 在肢和花冠管中起作用,而 Ht2 只在花冠管中起作用。Ht1 和 Ht2 基因控制 花青素和黄酮类化合物的 3′-羟基化。

从矮牵牛里分离出了编码 F3′H 活性的 cDNA 克隆,但是无论是 Ht1 或 Ht2,都与相应 的基因没有联系 [14]。玉米中黄酮类化合物的 3′-羟基化是由蛋白位点控制的。蛋白植物 糊粉层呈紫色的原因是大量花青素葡萄糖苷的积累。Larson 和 Bussard 检测了从玉米 种子中获得的微粒体准备物中 F3′H 活性的存在。山奈酚(黄酮)、柚皮素(黄酮类)、 和芹菜素(黄酮类)都是作为羟化酶的底物。lnhibitor 研究表明 F3′H 属于细胞色素

P-450 酶的超家族。

在金鱼草中,eosina 基因控制黄酮类化合物 3′位点的 8 羟基环。众所周知的隐性 基因型产生花中的芹菜素、山奈酚和天竺葵。然而在 Eos 植物中发现了相应的 3′,4′- 羟基化合物的踪迹。

⑤黄酮类化合物 3,5-羟化酶

控制矮牵牛花中 F3′5′H 活性的有两个基因位点,分别是 Hf1 和 Hf2,在柱头、花冠和 花粉中起作用的是 Hf1,而在花冠瓣中起作用的是 Hf2 [15]。F3′H 酶属于细胞色素 P450 超家 族。有超过 200 个不同的 P-450 序列主要来自哺乳动物。所有的 P-450 序列共有大量 的相似序列小区域。这些保守序列被用来设计简并寡核苷酸引物,该引物是用来分离用 PCR 扩增的矮牵牛的 P-450 序列。通过酵母中全长 cDNA 克隆基因的表达,证明了这两个不 同的 P450 基因克隆是编码 F33′H 活性的。这两个基因对应的是 Hf1 和 Hf2 的遗传位 点由 RFLP 图谱和矮牵牛的突变体互补线。

⑥二氢黄酮醇还原酶

已经通过转座子标签的方法将 DFR 基因从玉米和金鱼草中分离出来了。玉米中 a7 基因的隐形突变产生了无色的糊粉层。a7 基因被用转座原件 SpmlEn 标记,同时被 证明是通过 a7 cDNA 克隆的体外翻译来编码 DFR。金鱼草花青素生物合成淡紫色位 点的突变,产生了无色或淡紫色的花。从前体增强实验中,可以得出结论,pal 基因 编码 DFR。在该实验中,当 pal 突变的花被注入无色花青素而不是当它们被提供 DHQ 的时候可以观察到花青素的合成。使用转座元件(Tam3)探针分离不稳定插入等位 基因的方法将 pal 基因位点克隆。对 pal 产生确认的进一步证据来自于对序列的分析, 这个序列分析表明在 pal 基因和玉米的 a7 基因之间具有氨基酸的同源性。

用金鱼草的 DFR 克隆来分离矮牵牛中的同源基因。矮牵牛基因组有三个不同的 DFR 基因。三个基因分别是 dfrA, dfrB 和 dfrc。但是只有 dfrA 基因能在花器官中转 录的。用 RFLP 图谱和互补的方法证明 dfrA 基因与 An6 位点是相关的。矮牵牛的 DFR 酶将 DHM 优先转化为白飞燕草苷配基,DHQ 是个稀有的底物,DHK 不能被转化成 白天竺葵苷元。不同底物特异性解释了飞燕草衍生物的优先积累和矮牵牛天竺葵色素 的缺乏 [16]。

⑦花青素合成酶 将花青素源催化转化为有色的花青素的酶法没有被很好的表征,但是有相关的氧

化和脱水步骤 [17]。在玉米中,由花青素源转化为花青素的酶转化被 A2 基因的突变文献综述

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