1。4  研究目的和意义 9

1。5  主要研究内容 9

1。6  存在的问题 10

1。6。1 白僵菌使寄主死亡的原因 10

1。6。2 对白僵菌侵染致死说法 10

1。6。3  优良菌种资源发掘与选育技术 11

1。6。4  白僵菌产品的贮藏 11

1。6。5  白僵菌防治害虫对环境和生物的影响 11

第二章 材料与方法 12

2。1  实验试剂与仪器 12

2。2  实验方法 13

2。2。3 序列分析 13

2。2。5 处理仪器 13

2。2。6 在 NCBI 上利用 BLAST 进行相似性搜索 13

2。2。7 ClustalX 多序列比较 13

2。2。8 Mega 构建进化树 14

2。2。9 用 Dnastar 综合序列分析序列 14

2。2。10 蛋白二级结构预测 14

2。2。11 用 Swiss-model 进行蛋白质的三维结构预测 14

第三章 结果和分析 15

3。1  结果 15

3。1。1 白僵菌线粒体编码基因 15

3。1。2 在 NCBI 上利用 BLAST 进行相似性搜索 15

3。1。3 Blast 结果比对获得同源序列 17

3。2  数据分析 18

3。2。1 Clustal 进行多序列比对分析 18

3。2。2 进化树的构建 18

3。2。3 二级结构预测与分析 20

3。2。4 三维结构预测与分析 22

3。2。5 基因基本信息碱基分析 25

第四章 结论 29

致 谢 30

参考文献 31

第一章 绪论

1。1 白僵菌概述

1。1。1 白僵菌

白僵菌是目前世界上研究以及应用最多的一种虫生真菌,属于半知菌纲,链孢霉 目,链孢霉科,它同时也是一种被广泛应用的真菌性杀虫剂。白僵菌制剂对人和牲畜无毒, 对作物安全,无污染,对其它虫子有毒害,但对蚕有毒害[1]。白僵菌作为一种微生物杀虫剂 具有很大的潜力,它的杀虫作用会受到环境因素、菌株的影响,同时它也会受到自身的影 响。白僵菌的孢子在接触害虫的时候产生芽管,它是通过皮肤侵入其体内然后长成菌丝, 在此期间不断繁殖导致害虫新陈代谢紊乱而使其死亡。

与此同时,因为白僵菌具有这样的特性,也就是符合微生物被用作生物制剂使用的相 关要求[2],也就是说用白僵菌做生物制剂对它接触的动植物无害,而且要培养白僵菌,因为 白僵菌是寄生,他只需要一个寄主,所以培养白僵菌相对来说比较简单,在此之后,还有就 是它的致病性,即对昆虫的毒力,满足可以使害虫数量降低,或者杀死害虫,也就是将害虫 的数量控制在人们可以接受的水平下,[1]这些条件,白僵菌都是满足的。因为大量使用化学 杀虫剂对环境有很大危害,为了有效避免或减少这种危害,人们开始采用生物防治,就根据 现在的情况来看,真菌杀虫剂是一种最有希望的,也是最有效的,可以用被用作来化学杀虫 剂的替代产品,甚至在保护环境方面更是远胜于化学杀虫剂。可是,尽管人们清楚的认识 到了这一点,一个多世纪以来,人们虽然一直在探索性质优良的微生物杀虫剂[3],但是,我们 在这方面取得的成绩却是少之又少的。在防治叶面害虫中真菌取得了个别案例额的成功, 而白僵菌具有对人、畜无毒,对作物安全,无残留、无污染,但对蚕有毒害的性质让它成为 一种有效的生物防治剂。