沃特世 ACQUITYTM UPLC I-Class 超高效液相色谱系统-Xevo G2-XS QTof 质谱联 用仪；Masslynx(4.1 版本)质谱工作站；Milli-Q 超纯水器（Millipore Inc）；Genie Vortex-2 振荡器；Thermo SPD-2010 离心浓缩装置；台式高速冷冻离心机。

1．3 生物样品中中药方 LC-MS/MS 测定方法的建立

1．3．1 色谱条件

色谱柱： BEH C18 1.7m 100 mm×2.1 mm I.D. (Waters 公司)； 流动相：采用梯度洗脱方式，流动相 A 为含 0.1%甲酸的超纯水，流动相 B 为乙腈；

洗脱梯度如下：

0.50 Pump B.Conc 10%

5.00 Pump B.Conc 95%

7.00 Pump B.Conc 95%

7.10 Pump B.Conc 10%

10.0 Pump STOP

流 速： 0.4 ml/min

柱 温： 35℃

1．3．2 质谱条件

离子化方式：电喷雾离子化（ESI）； 采集方式：质谱多反应监测（multiple reaction monitoring, MRM）； 离子源温度：120  ℃；

脱溶剂气体为高纯度氮气, 温度为 450 ℃, 流速为 800 L·h−1；

毛细管电压为 1 kV；离子化模式为正离子； 锥孔气流速：50L/h；

锥孔电压统一设为 40 V；

碰撞能量（CE）分别为：C4:30V

C7:25V C12:30V C13:32V C16:25V C23:35V C34:35V C25:20V C26:20V IS1:30V IS2:25V

准确质量数用亮氨酸脑啡肽作校正液。

MRM 检测离子分别为：

C4 m/z 481.171→197.0806 C7 m/z 195.0657→145.0279 C12 m/z 581.1870→273.0765 C13 m/z 611.1976→303.0868 C16 m/z 279.1232→189.0551 C23 m/z 823.4116→453.3370 C34 m/z 781.4738→455.3525 C25 m/z 403.1393→373.1022 C26 m/z 373.1287→343.0917 IS1 m/z 254.0599→156.0119 IS2: m/z 433.2226→384.2050

1．3．3 标准溶液的配置

芍药内酯苷(C4)，阿魏酸(C7)，柚皮苷(C12)，橙皮苷(C13)，水合橙皮内酯(C16)， 甘草酸(C23)，柴胡皂苷 A(C34)，川陈皮素（C25），橘皮素（C26）购自中检院，临用 时用甲醇稀释到相应的工作液浓度，如表 1-1。

表 1-1 标准溶液配制的要求

成分 浓度 ng/ml

芍药内酯苷(C4) 776.56;1242.5;1553.13;3106.25;6212.5;1242.5

阿魏酸(C7) 332.5;415.63;831.25;1330;1662.5;2660;6650;10640;13300;21280

柚皮苷(C12) 301.56;603.13;96;1206.25;1930;2412.5;3860;4825;7720;9650;15440

橙皮苷(C13) 256.25;320.31;640.63;1025;1281.25;2050;2562.5;5125;8200;16400

水合橙皮内酯(C16) 500;1500;2500;5000;10000;20000;25000

标准品 甘草酸(C23) 50.63;101.25;202.5;253.13;506.25;810;1620;3240;4050;6480;8100;12960;16200

柴胡皂苷 A(C34) 38.59;77.19;154.38;192.97;308.75;385.94;771.88;1235;2470;3087.5;4940;6175;9880

19760;24700

川陈皮素(C25) 柴胡舒肝散药物代谢动力学的研究(3):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_205294.html