亚硝酸盐还原酶发酵工艺研究(5)
(1)寻找一种添加剂可以全部或部分替代亚硝酸盐；
(2)寻找一种添加物可以阻断产物中亚硝酸盐的形成。对于前者而言，目前还没有找到可以替代亚硝酸盐的添加剂；对于后者，人们采用了一些化学和生物的方法，但效果都不是很理想。[1]
本实验采用乳酸菌为菌体，对产亚硝酸盐还原酶乳酸菌培养基组成和发酵条件的优化，同时对菌体细胞进行固定化，得到固定化细胞在处理污水中亚硝酸盐的应用研究。
1.4 研究内容
本课题首先对亚硝酸钠的加样时间进行研究。其次, 对培养基的最适氮源进行分析，并对氮源进行优化条件的测定，最后，研究了海藻酸钠固定乳酸菌工艺及降解废水中的亚硝酸钠的效果。
2材料和方法
2.1 材料
2.1.1 实验菌种：
实验菌种：乳酸菌，生物工程专业实验室分离保藏。
2.1.2 实验试剂
本实验所用试剂见表2.1:
表2.1 实验试剂
实验试剂 试剂纯度 厂家
牛肉膏 生化试剂 国药集团化学试剂有限公司
酵母膏 生化试剂 国药集团化学试剂有限公司
葡萄糖 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
吐温－80 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
硫酸镁 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
无水乙酸钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
硫酸锰 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
柠檬酸三铵 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
磷酸氢二钾 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
大豆蛋白胨 生化试剂 国药集团化学试剂有限公司
硝酸钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
硫酸铵 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
亚硝酸钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
硼砂 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
亚铁氰化钾 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
乙酸锌 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
盐酸萘乙二胺 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
对氨基苯磺酸 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
氯化钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
氯化钙 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
氢氧化钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
浓盐酸 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
2.1.3 培养基
(1)菌种保存培养基
葡萄糖：20 g；牛肉膏：10 g；酵母膏：5 g；鱼粉：10 g；无水乙酸钠：5g；柠檬酸三铵：2 g；磷酸氢二钾：2 g；硫酸镁：0.58 g；硫酸锰：0.25 g；吐温80：1 mL；水1000 mL，调节pH值6.4，加入20 g的琼脂粉，微波炉融化。121℃高压蒸汽灭菌20 min。
（2）液体种子培养基
葡萄糖：5.0 g；牛肉膏：10.0 g；酵母膏：5.0 g；大豆蛋白胨：10.0 g；无水乙酸钠：5.0 g；柠檬酸三铵：2.0 g；磷酸氢二钾：1.0 g；七水合硫酸镁：0.2 g；一水合硫酸锰：0.05 g；去离子水：1000 mL，调节pH值7.0。121℃高压蒸汽灭菌20 min。
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