4。2 九龙山榧的分类地位 9

4。3 更多的基因片段联合分析的必要性 9

参考文献 10

致谢 10

1 引  言

榧属Torreya植物是红豆杉科Taxaceae的常绿乔木，为国家保护植物，东亚-北美洲际间断分布。据记载共7种，其中东亚有5种、2变种，北美有2种[1-5]。我国有野生榧属植物4种、2变种，自横断山区分布至华东，另有从日本引入栽培的T。 nucifera[1]。榧属作为古老珍稀孑遗植物，具有重要科学研究价值以及巨大的经济效益，所有种（包括变种）都被列为国家二级保护。该属植物作为木材结构坚实紧密，纹理清晰细致，同时耐湿性好，抗腐性强，因此广泛用于土木建筑及家具等用材；此外榧树的种子“香榧”是著名的干果。但目前，国内外利用形态性状结合基因序列对本属系统学研究较少。本属植物利用价值比较高，另外，本省的诸暨市及其邻近县、市有大量的香榧种植，成为当地农民收入的重要来源。可以通过本研究，探讨栽培香榧的近缘植物，也可为优良品种选育提供理论依据。榧属植物研究历程较为悠久，我国学者对榧属的研究最早可追溯至20世纪30年代。1925年，陈焕镛依据秦仁昌采自浙江仙居县1号叶片特长的标本，发表了长叶榧Torreya jackii Chun。1927年，胡先骕根据采自浙江诸暨县枫桥(为榧树集中栽培区)和安徽休宁的标本，发表了榧树Torreya grandis的4个变种和2个变型（均为栽培品种），并对榧属作了系统的研究，在《中国榧属之研究》一文中根据种子的胚乳向内深皱和微皱，将榧属分为两组，即皱乳榧组Sect。 Ruminatae Hu与榧组Sect。 Nuciferac。此外，在新中国成立之后，郑万钧、傅立国、郝景盛等植物学者，他们对植物调查采集的不断深入，以及植物志的编撰，都为后人的研究提供了很好的参考资料。论文网

1902年，Coulter and Land．首次研究榧属植物的胚胎学，之后，Oliver、Robertson、Qinuma、Florin等[7-10]也开始其细胞学研究，唐锡华、王伏雄、汤仲勋、施良等也相继在胚胎学研究。郑万钧、傅立国等[1-2]对中国的榧属植物进行了深入的分类研究。姚壁君、胡玉熹等[11-18]开展了木材解剖结构得研究。80年代以后，又有学者从生物化学、孢粉、生态学等学科对榧属植物进行研究，为后人研究榧属植物做了极大的贡献。

本研究利用叶绿体基因片段，探讨浙江榧属植物的系统分类关系，旨在解决的问题有：以往把榧属植物划分成2个组是否合理？九龙山榧形态性状介于长叶榧和榧属之间，是否是杂交起源的？ 

2 材料与方法

2。1 实验材料

实验材料包括榧树Torreya grandis、九龙山榧T。 grandis var。 jiulongshanensis、长叶榧T。 jackii和巴山榧T。 fargesii，共3种、1变种的20个个体。各个材料来源详见表1。

2。2 实验方法

2。2。1 基因组DNA的提取

基因组总DNA采用天根（TIANGEN）植物基因组试剂盒提取。操作步骤如下：用液氮将植物新鲜组织约100mg或干重组织约30mg进行充分碾磨。在一离心管内先装上700 uL 65℃预热缓冲液GP1（实验前先在GP1中加入硫基乙醇，浓度始终为0。1%），然后把研磨好的粉末迅速转移到此离心管中并且迅速颠倒混匀后，将离心管放在水浴锅中水浴加热并多次颠倒离心管使得样品能混合均匀，加入氯仿后上下颠倒充分混匀，然后进行离心。取一个新的离心管，小心地将上一步所得上层水相转入，加入缓冲液GP2并充分混匀，然后再将混合液体转入吸附柱CB3中，在离心机中离心，弃掉废液（也可分次加入离心）。向吸附柱CB3中加入缓冲液GD(在实验前先加入无水乙醇)，离心后将废液倒掉，将吸附柱CB3放入收集管中。将漂洗液PW(在实验前先加入无水乙醇)加入吸附柱CB3，离心并将废液倒掉，将吸附柱CB3放入收集管中。在此步操作之后，放入离心机中离心，然后倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中的残余的漂洗液。将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空加50-200uL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min， 然后放入离心机中离心，最后将溶液收集到离心管中。