⑨在光照培养箱生长2周后,对幼苗拍照。
1。1。5盐胁迫下土培苗生长状态统计
①配制4个B5培养基(不加NaCl)。
②取4个1。5 ml的离心管,将适当的4个株系的拟南芥种子(其中1个株系为野生型,另3个株系为转黄瓜CsTIR基因的拟南芥种子)分别置于1。5ml的离心管中,加入1 ml 70%酒精混匀3 min,小心吸除酒精。
③加入1。5 ml 10% NaClO震荡混匀10 min,吸除NaClO。
④用无菌水1 ml清洗种子4~5次,吹打清洗。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-
⑤第5次时加入1。5 ml无菌水混匀后静置10 min,再清洗1~2次。
⑥取少量无菌水于离心管,混匀,用灭菌的1 ml移液器将每个株系消毒后的种子播种于B5培养基上进行培养,每个培养基60~80颗种子。透气胶带封口后,置于4 ℃冰箱中2 d,春化破除种子休眠。
⑦将培养皿垂直放置于光照培养箱培养。设置光照强度4000 lx,恒温22~24 ℃,恒湿60%,16 h光照/8 h黑暗。
⑧在光照培养箱生长5 d后,幼苗具两片子叶,根长1~2 cm,此时将幼苗移入土壤中栽培。配制2种营养液,一种含300 mmol/LNaCl的霍格兰氏营养液,另一种不含NaCl的霍格兰氏营养液。将营养土和珍珠岩按2:1的比例混匀,加入不含NaCl的霍格兰氏营养液,搅拌混匀。土壤灭菌冷却之后装入塑料花盆中,稍稍压实。将花盆分为2组,置于2个托盘中,将每个株系的拟南芥幼苗分别移种于2组花盆中。用镊子在土壤中扎出小孔,小心夹出培养基上的幼苗,去除粘附在根上的培养基,根部垂直嵌入小孔,拨土将根掩埋,苗挺直,叶片朝上。其中一个托盘加入含300 mmol/LNaCl的霍格兰氏营养液,另一个托盘加入不含NaCl的霍格兰氏营养液。移苗完成后,托盘加盖有机罩,置于光照培养箱中保湿培养。
⑨每隔2天,实验组浇灌含300 mmol/LNaCl的霍格兰氏营养液,对照组浇灌不含NaCl的霍格兰氏营养液,10 d之后观察实验组和对照组各株系幼苗的生长状况,并拍照保存。