3。1  对硝基苯酚（pNP）溶液标准曲线的制备

①取洁净的5支试管，分别编号，依次加入0。025 ml、0。050 ml、0。075 ml、0。100 ml、0。125 ml、0。150 ml对硝基苯酚溶液（10 mmol/L）

②向以上各试管中加入1毫升pNPG溶液，混匀。

③70℃水浴10分钟，再立刻加入1毫升1 mol/L碳酸钠溶液，混匀，再加入蒸馏水定容至25 ml，等待冷却至室温。

④以空白调零，在400 nm波长下比色。得到A400 。

⑤以对硝基苯酚量（μmol）为横坐标，以A400 的值为纵坐标，作图，得到标准曲线及方程[16]。

⑥计算数据处理及pNP的标曲如表1、图1所示。

表1数据处理

pNP量（μmol） 吸光光度值A

0。25 0。1831

0。50 0。3519

0。75 0。5206

1。00 0。6893

1。25 0。8580

1。50 1。0268

图1对硝基苯酚标准曲线

β-葡萄糖苷酶活力计算公式为：

U=10×A×N×1 /（0。1 ml×10 min）

U：酶活力单位（U/ml*min-1）；A为根据吸光度在标准曲线上查得的对硝基苯酚量（μmol）；N：酶液稀释倍数，本实验该值为1，未稀释；1 /（0。1 ml×10 min）：换算成酶液1 ml反应1 min[17]。来~自,优^尔-论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

经过统计分析，得到线性回归曲线为y=0。6749x+0。0144，R2=0。9994，可以说明这条曲线可信度比较高，是可以应用的。

3。2  单因素实验结果分析

3。2。1  接种量大小对酶活力的影响

接种量不同会对重组马克斯克鲁维酵母酵母产β-葡萄糖苷酶活性产生影响，接种量过小，会导致酵母数量增长过于缓慢，使产酶量过小，而接种量过大会使酵母数量增长速度过快，底物消耗加剧，代谢废物增多[18]，影响酵母生长及产酶。结果见图2。